Prinsip jeung Métode Analisis Kuantitatif ku Kromatografi Cair

Mékanisme pamisahan kromatografi cair dumasar kana bédana afinitas komponén dina campuran pikeun dua fase.

Numutkeun fase diam nu béda, kromatografi cair dibagi jadi kromatografi cair-padet, kromatografi cair-cair jeung kromatografi fase kabeungkeut.Anu paling loba dipaké nyaéta kromatografi cair-padet kalayan silika gél salaku pangisi sareng kromatografi fase kabeungkeut ku microsilica salaku matriks.

Nurutkeun wangun fase diam, kromatografi cair bisa dibagi jadi kromatografi kolom, kromatografi kertas jeung kromatografi lapis ipis.Numutkeun kapasitas adsorption, éta bisa dibagi kana kromatografi adsorption, kromatografi partisi, kromatografi bursa ion jeung kromatografi permeation gél.

Dina taun-taun ayeuna, sistem aliran cair tekanan tinggi parantos ditambahkeun kana sistem kromatografi kolom cair supados fase gerak ngalir gancang dina tekenan luhur pikeun ningkatkeun éfék pamisahan, janten éfisién tinggi (ogé katelah tekanan tinggi) kromatografi cair. geus mecenghul.

BAGIAN
01 Prinsip Analisis Kuantitatif Kromatografi Cair

Pikeun ngitung dumasar kana kualitatif, zat murni diperyogikeun salaku standar;

Kuantifikasi kromatografi cair mangrupikeun metode kuantitatif: nyaéta, jumlah analit dina campuran diperkirakeun tina jumlah sampel standar murni anu dipikanyaho.

BAGIAN
02 Dasar pikeun Kuantifikasi ku Kromatografi Cair

Jumlah komponén diukur (W) sabanding jeung nilai respon (A) (jangkungna puncak atawa aréa puncak), W=f×A.

Faktor koreksi kuantitatif (f): Éta konstanta proporsionalitas rumus itungan kuantitatif, sarta harti fisikna nyaéta jumlah komponén diukur digambarkeun ku nilai respon unit (area puncak).

Faktor koreksi kuantitatif tiasa didapet tina jumlah sampel standar anu dipikanyaho sareng nilai résponna.

Ukur nilai réspon komponén anu teu dipikanyaho, sareng jumlah komponén tiasa didapet ku faktor koreksi kuantitatif.

BAGIAN
03 Istilah umum dina analisis kuantitatif

Sampel (sampel): solusi anu ngandung analit pikeun analisis kromatografi.Dibagi kana sampel baku sarta kanyahoan.

Standar: Produk murni kalayan konsentrasi anu dipikanyaho.Sampel teu dipikanyaho (teu terang): Campuran anu konsentrasina kedah diuji.

Beurat sampel: Timbangan aslina tina sampel anu bakal diuji.

Éncér: Faktor éncér tina sampel anu teu dipikanyaho.

Komponén : puncak kromatografi pikeun dianalisis sacara kuantitatif, nyaéta, analit anu eusina henteu dipikanyaho.

Jumlah komponén (jumlah): eusi (atawa konsentrasi) tina zat nu bakal diuji.

Integeritas : Prosés komputasi pikeun ngukur aréa puncak puncak kromatografi ku komputer.

Kurva Calibration: Kurva linier eusi komponén versus nilai respon, dijieun tina jumlah zat baku dipikawanoh, dipaké pikeun nangtukeun eusi kanyahoan analyte nu.

BAGIAN
04 Analisis Kuantitatif Kromatografi Cairan

1. Pilih metode kromatografi anu cocog pikeun analisis kuantitatif:

l Konpirmasikeun puncak komponén anu dideteksi sareng ngahontal résolusi (R) langkung ageung tibatan 1,5

l Nangtukeun konsistensi (purity) puncak kromatografi komponén diuji

l Nangtukeun wates deteksi sareng wates kuantifikasi metodeu;sensitipitas sareng rentang linier

2. Ngadegkeun kurva calibration kalawan sampel baku tina konsentrasi béda

3. Pariksa akurasi sarta precision sahiji metodeu kuantitatif

4. Anggo parangkat lunak manajemén kromatografi anu saluyu pikeun ngalaksanakeun kumpulan sampel, ngolah data sareng ngalaporkeun hasil

BAGIAN
05 Idéntifikasi puncak kuantitatif (kualitatif)

Identipikasi sacara kualitatif unggal puncak kromatografi pikeun diukur

Kahiji, paké sampel standar pikeun nangtukeun waktu ingetan (Rt) puncak kromatografi pikeun diukur.Ku ngabandingkeun waktu ingetan, panggihan komponén pakait jeung unggal puncak kromatografi dina sampel kanyahoan.Métode kualitatif kromatografi nyaéta ngabandingkeun waktu ingetan jeung sampel baku.Kriteria henteu cekapkonfirmasi salajengna (kualitatif)

1. Métode tambahan baku

2. Paké métode séjén dina waktos anu sareng: métode kromatografi séjén (ngarobah mékanisme, kayaning: ngagunakeun kolom kromatografi béda), detéktor séjén (PDA: spéktrum ngabandingkeun, spéktrum pilarian perpustakaan; MS: analisis spéktrum massa, pilarian perpustakaan spéktrum)

3. Instrumén jeung métode séjénna

BAGIAN
06 Konfirmasi Konsistensi Puncak Kuantitatif

Konfirmasi konsistensi puncak kromatografi (purity)

Pastikeun yén ngan ukur aya hiji komponén anu diukur dina unggal puncak kromatografi

Pariksa gangguan tina zat ko-eluting (kotoran)

Métode pikeun Konfirmasi Konsistensi Puncak Kromatografi (Kamurnian)

Ngabandingkeun Spectrograms kalawan Photodiode Matrix (PDA) Detektor

Idéntifikasi Purity Puncak

2996 Téori Angle Purity

Métode kuantitatif anu biasa dianggo dina PART 07

Métode kurva standar, dibagi kana metode standar éksternal sareng metode standar internal:

1. Métode baku éksternal: panglobana dipaké dina kromatografi cair

Runtuyan sampel standar tina konsentrasi dipikawanoh disiapkeun ngagunakeun sampel murni tina sanyawa nu bakal diuji salaku sampel baku.disuntikkeun kana kolom nepi ka nilai respon na (area puncak).
Dina rentang nu tangtu, aya hubungan liniér alus antara konsentrasi sampel baku jeung nilai respon, nyaéta W = f×A, sarta kurva baku dijieun.

Dina kaayaan ékspérimén anu sami, nyuntik sampel anu teu dipikanyaho pikeun kéngingkeun nilai réspon komponén anu bakal diukur.Numutkeun koefisien f anu dipikanyaho, konsentrasi komponén anu bakal diukur tiasa dicandak.

Kaunggulan tina metodeu standar éksternal:operasi basajan tur itungan, nya éta métode kuantitatif ilahar dipaké;teu perlu pikeun tiap komponén pikeun dideteksi na eluted;sampel baku diperlukeun;kaayaan ukuran sampel baku jeung sampel kanyahoan kudu konsisten;volume suntik kedah akurat.

Kakurangan metode standar éksternal:Kaayaan ékspérimén diwajibkeun luhur, sapertos sensitipitas detektor, laju aliran, sareng komposisi fase mobile teu tiasa dirobih;volume unggal suntik kudu boga repeatability alus.

2. Métode standar internal: akurat, tapi troublesome, paling dipaké dina métode baku

Sajumlah standar internal anu dipikanyaho ditambah kana standar pikeun ngadamel standar campuran, sareng séri standar kerja konsentrasi anu dipikanyaho disiapkeun.Babandingan molar standar pikeun standar internal dina standar campuran tetep unchanged.Nyuntikkeun kana kolom kromatografi sareng nyandak (area puncak sampel standar/area puncak sampel standar internal) salaku nilai réspon.Nurutkeun hubungan linier antara nilai réspon jeung konsentrasi standar gawé, nyaéta W= f×A, kurva baku dijieun.

Sajumlah standar internal anu dipikanyaho ditambah kana sampel anu teu dipikanyaho sareng disuntikkeun kana kolom pikeun kéngingkeun nilai réspon komponén anu bakal diukur.Numutkeun koefisien f anu dipikanyaho, konsentrasi komponén anu bakal diukur tiasa dicandak.

Karakteristik metode standar internal:Salila operasi, sampel jeung standar internal dicampurkeun babarengan jeung nyuntik kana kolom kromatografi, jadi salami babandingan jumlah komponén diukur jeung standar internal dina leyuran dicampur téh konstan, parobahan volume sampel. moal mangaruhan hasil kuantitatif..Metoda baku internal offsets pangaruh volume sampel , komo fase mobile na detektor, jadi éta leuwih akurat ti métode baku éksternal.

BAGIAN
08 Faktor nu mangaruhan Hasil Analisis Kuantitatif

akurasi goréng bisa disababkeun ku:

Integrasi wewengkon puncak salah, dékomposisi sampel atawa najis diwanohkeun salila persiapan sampel, vial sampel teu disegel, sampel atawa volatilization pangleyur, préparasi sampel salah, masalah suntikan sampel, préparasi baku internal salah.

Alesan anu mungkin pikeun akurasi goréng:

integrasi puncak salah, masalah suntik atawa injector, dékomposisi sampel atawa najis diwanohkeun salila persiapan sampel, masalah kromatografi, réspon detéktor didegradasi